Der Spieler stellt den jungen Adligen Ezio dar, der von den rivalisierenden Herrscherfamilien im Italien des Renaissance-Zeitalters betrogen wird. Ezios folgender Rachefeldzug zieht den Spieler in eine epische Erzählung, die mehr Missionsabwechslung, überraschend neue Spielelemente, eine Vielzahl von Waffen und eine tiefgründige Charakterentwicklung verspricht, was sowohl Fans als auch Neueinsteigern sicher gefällt. Eine neu entdeckte Freiheit: Der Spieler wird Missionen ausführen können, wann er will und wie er will. Die offene Welt bringt das freie Fortbewegen des ersten Teils zurück und fügt neue Elemente wie Schwimmen und sogar Fliegen hinzu. Die neuen Spielmöglichkeiten sorgen dafür, dass der Spieler das Spiel so durchspielen kann, wie er es möchte.