Der von Pro-Wrestling besessene Auftragskiller Travis Touchdown kehrt zurück, um seinen besten Freund zu rächen, der auf brutalste Weise ermordet wurde. Noch vor drei Jahren stand er an der Spitze der United Assassins Association (UAA). Nun muss Travis sich 51 Ränge hocharbeiten, um wieder die Nummer 1 unter den Killern zu werden. Es ist keine leichte Aufgabe, denn die Bosse sind tödlicher denn je. Im Spiel gibt es verschiedene Waffen wie das Dual-Beam Katana und einzigartige Wrestling-Moves. In der Fortsetzung von No More Heroes gibt es zwei neue spielbare Charaktere: Henry, Travis Zwillingsbruder, der einst mit Sylvia Christel verheiratet war sowie Travis Protegé Shinobu Jacobs. Großes Suchtpotential liefern die 8-bit Arkade-style Minigames, mit denen Travis Geld für Waffen und Kleidung verdienen kann. Mit der leicht zu navigierenden 2D Karte kann der Spieler sich voll und ganz auf die Action konzentrieren und direkt zu den verschiedenen Kämpfen springen.